Singolo esperimento SPR con immobilizzazione diretta.
L’esperimento SPR include l’immobilizzazione del ligando (proteina, peptide, oligo modificati) su sensor chip (CM5) mediante legame covalente (amine coupling), un esperimento di cinetica a singolo ciclo che prevede iniezioni dell’analita (proteina, peptide, acido nucleico) senza rigenerazione, o multiciclo, con rigenerazione dopo ogni iniezione di analita. L’analisi dei dati verrà effettuata mediante il software BiaEvaluation (Biacore, GE Healthcare) per ottenere i parametri cinetici dell’interazione. Nota: ligando e analita devono essere forniti dall’utente con un elevato livello di purezza (>70%).
Esperimenti di SPR con immobilizzazione indiretta mediante immunocattura con anticorpo anti-GST.
L’esperimento SPR prevede l’immobilizzazione covalentemente sul sensor chip di un anticorpo specifico per il GST tag (Anti GST capture kit, GE Healthcare) in grado di legare con elevata affinità il ligando contenente il tag GST. La cinetica singolo ciclo o multiciclo potrà essere ripetuta in seguito a rigenerazione del chip ripartendo dall’immuncattura del ligando. L’analisi dei dati verrà effettuata mediante il software BiaEvaluation per ottenere i parametri cinetici dell’interazione.