Programma
Soluzioni tampone e pH. Ionizzazione di amminoacidi e proteine in funzione del pH. I principi dell'indagine biochimica. Teria degli erori; accuratezza e precisione. Centrifugazione. Principi base della sedimentazione. Centrifughe e loro uso. Rotori. Metodi di separazione nella centrifugazione preparativa. Centrifugazione differenziale. Centrifugazione in gradiente di densità. Ultracentrifugazione analitica. Metodi cromatografici: cromatografia per assorbimento, di ripartizione, a scambio ionico, per esclusione molecolare, per affinità, per interazione idrofobica, HPLC, gas cromatografia. Efficienza dei procedimenti cromatografici e scelta di un procedimento conveniente. Tecniche elettroforetiche: teoria, leggi, apparati. Classificazione dei metodi elettroforetici. Elettroforesi in fase libera ed elettroforesi zonale. Elettroforesi su gel. Analisi in condizioni native e denaturanti con applicazioni per la determinazione del peso molecolare di proteine (SDS-PAGE). Western blotting. Isoelettrofocalizzazione per la determinazione del punto isoelettrico di proteine. Elettroforesi bidimensionale. Elettroforesi di acidi nucleici. Elettroforesi capillare. Spettrofotometria: leggi ed applicazioni. Legge di Lambert-Beer. Gruppi cromofori e spettri di assorbimento di proteine ed acidi nucleici. Metodi spettrofotometrici per la determinazione della concentrazione delle proteine.. Strategie per la purificazione di proteine. Estrazione cellulare, dialisi ed ultrafiltrazione. Precipitazione frazionata con sali, con solventi organici, al punto isoelettrico, al calore.. Studi sulla struttura delle proteine. Determinazione della composizione amminoacidica, delle cisteine libere, della sequenza amminoacidica di una proteina e localizzazione dei ponti disolfuro. La spettrometria di massa: principi generali.Testi consigliati
Testi consigliati :
WILSON, WALKER: Biochimica e biologia molecolare. Principi e tecniche.(Raffaello Cortina)
De Marco, Cini: Principi di metodologia biochimica (Piccin)
Bonaccorsi, Contestabile, Di Salv: Metodologie biochimiche (Casa Editrice Ambrosiana)Propedeuticità
E' consigliabile avere conoscenze di Biochimica e Biologia MolecolareFrequenza
FacoltativaMetodologia didattica
Ore lezione: 40Valutazione del profitto
Prova orale
Descrizione dei metodi di accertamento
L'esame si svolge nelle forme stabilite dall'art. 23 del Regolamento Didattico di Ateneo. L'esame è orale e si basa sulla valutazione delle conoscenze acquisite dallo studente, con particolare riguardo alla capacità di fare collegamenti fra i vari argomenti trattati. Trattandosi di un corso metodologico, lo studente deve dimostrare di saper applicare quanto studiato alla soluzione di problemi e/o indagini che vengono normalmente svolte in un laboratorio di ricerca. Nella valutazione della prova e nell'attribuzione del voto finale si terrà anche conto della capacità di analisi, di sintesi e della padronanza di espressione. Dello svolgimento dell'esame viene redatto apposito verbale, sottoscritto dal Presidente e dai membri della commissione e dallo studente esaminato. Il voto è espresso in trentesimi, con eventuale lode. Il superamento dell'esame presuppone il conferimento di un voto non inferiore ai diciotto/trentesimi e comporta l'attribuzione dei corrispondenti crediti formativi universitari.
Luogo lezioni
Orario lezioni
Comunicazioni
Martedì e Mercoledì dalle ore 11.00 alle 13.00 nell'Ufficio del Docente, stanza 308, II piano del Blocco D.Link a materiale didattico
non presente